实验室考试

实验技术相关

1.常用的载体构建

• 超表达载体

• RNAi载体

• VIGS载体

• 酵母双杂载体

• 亚细胞定位载体

2. miRNA载体构建

3. Crispr cas9 载体构建

DNA的提取

1. 试剂盒的方法用做southern杂交

2. CTAB的提取方法用于PCR检测

浓度的测定

• 跑胶可以初步判断浓度和DNA是否降解；蛋白及多糖的含量

• Nanodrop 2000 测定OD260计算DNA的浓度

RNA的提取

• 传统方法 异硫氰酸胍法

• 试剂盒法（Sigma 、天根）

  RNA提取之后需要跑胶进行RNA质量的检测

  • RNA反转录

  • miRNA反转录

  • Real-time 实时荧光定量PCR技术

    荧光信号的按比例增加，反应DNA的增加；通过与标准曲线进行比较反应未知模板的变化情况

Northern Blot(地高辛标记法)

在变性的条件下将待检测的RNA进行电泳，之后用探针进行杂交检测

对应还有一个 Small RNA Northern Blot 实验

RLM-RACE

用来确定nRNA被剪切的位置

蛋白实验相关

• 原核表达

  将真核生物蛋白在原核生物如大肠杆菌中进行大量表达的过程

• SDS-PAGE 将SDS处理变性后的蛋白分离

• western Blot 将蛋白体悟与抗体探针进行杂交，再使用显色的二抗进行蛋白的检测

• GST-PULL DOWN 判断两个蛋白是否能够体外互作

• 染色质免疫共沉淀 ：研究体内DNA与蛋白质互作

• 蛋白质免疫共沉淀 ：目的蛋白在细胞内与兴趣蛋白的结合情况，用于研究蛋白体内互作

• 蛋白双向电泳

仪器相关

• 毛细管电泳仪

• DU800核酸蛋白分析仪

• Nanodrop2000

• 紫外交联仪

• 磷屏仪

• 半干转仪

• 冷冻离心机

• 真空泵

• 超声波仪

• 双向电泳SDS-PAGE电泳仪

• 纯水仪

• LABCONCO冻干机

• 人工气候箱

• 光合测定仪

• 烘箱 干燥箱

• 隔水式恒温培养箱

• 生化培养箱

• 摇床

• Agilent_1200液相色谱

• 氮吹仪

• LEICA体视显微镜

• ZEISS荧光显微镜

• 烘片机

• 切片机